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一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

表格一：實(shí)驗(yàn)儀器

表格二：試劑

二、 實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)胞培養(yǎng) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的 A172 細(xì)胞，按 1*105個(gè)/mL 以 1mL 體積接種于 6 孔板內(nèi)。無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)過(guò)夜,到轉(zhuǎn)染時(shí)使細(xì)胞達(dá)到 70％的匯合率。

轉(zhuǎn)染

將 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 無(wú)血清的 DMEM 中,混合均勻。

將 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 無(wú)血清的 DMEM 中，混合均

勻。在室溫下孵育 5 分鐘。

將上述兩種混合物混合（總體積 800uL）,輕輕混合均勻在室溫下孵育

20 分鐘形成復(fù)合物。

在 6 孔板中每孔加入 800uL 復(fù)合物。十字法混合均勻。

細(xì)胞在 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 6h 后棄上清液,并加入 10％胎牛血

清的 DMEM 培養(yǎng)液。

固定

培養(yǎng) 48h 后小心吸去上清，胰酶消化并離心收集細(xì)胞（1000rpm/min），棄上清，用預(yù)冷 PBS 洗細(xì)胞 2 次，加入預(yù)冷 70％乙醇， -20℃固定保存。

染色

離心，棄上清；

1mL PBS 洗 1 次，離心；

加入 10uL RNase A（20ug/mL）于 500uL PBS, 37 度 30min 孵育后，離心；

PBS 洗 1 次，離心；

加 10uL PI (50 ug/mL)于 500 uL PBS，室溫避光 30min。  

檢測(cè)

以標(biāo)準(zhǔn)程序用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，汞激發(fā)波長(zhǎng) 488nm，計(jì)數(shù) 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，結(jié)果

使用 Modfit 軟件分析。

三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

省略