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Zeta Life Advanced 系列高效DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑使用說明

品牌：Zeta Life

名稱：Advanced 系列高效DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

㈠注意事項(xiàng)

1、質(zhì)粒DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于Buffer。溶解于Buffer

的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降80%左右，甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素，內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降

70%-80%左右，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用Qiagen、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提

取試劑盒）。

3、Zeta Life Advanced 系列高效DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑在復(fù)合物的制備過程中是絕對(duì)不能

用其他任何試劑對(duì)核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑兩者按1:1 比例直接混

合，如果進(jìn)行了稀釋會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。?span>80%的客戶會(huì)按Lipo 的方法進(jìn)行稀釋）。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打10-15 次，室溫孵育10-15 分鐘后即可加入細(xì)

胞培養(yǎng)板。

5、轉(zhuǎn)染24 小時(shí)后進(jìn)行正常換液，不能像Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染4-6 小時(shí)后換液。

㈡簡易操作說明

一、實(shí)驗(yàn)中核酸準(zhǔn)備要求：

1、RNA 濃度20 uM /L。

2、質(zhì)粒DNA 濃度200 ng-2 ug/u（l 注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素）。

二、操作流程

1、先將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞匯合度在60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2、復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15 次混

勻，室溫靜止10-15 分鐘。

3、將復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

4、轉(zhuǎn)染24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA 轉(zhuǎn)染48-72 小時(shí)后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時(shí)檢測mRNA 或蛋白表

達(dá)。若進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。

siRNA 轉(zhuǎn)染后9 小時(shí)熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測mRNA 或蛋白表達(dá)。

三、以細(xì)胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶為例進(jìn)行轉(zhuǎn)染試劑、質(zhì)粒DNA 及siRNA 的用量