技術(shù)原理

細(xì)胞周期分為間期與分裂期兩個階段。間期又分為三期：即DNA合成期（G1期）、DNA合成期（S期）與DNA合成后期（G2期）。某些細(xì)胞在分裂結(jié)束后暫時離開細(xì)胞周期，停止細(xì)胞分裂，執(zhí)行一定生物學(xué)功能（G0期）。由于細(xì)胞周期各時相的DNA含量不同，通常正常細(xì)胞的G1/ G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。 PI可以與DNA結(jié)合，其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。因此，通過流式細(xì)胞儀PI染色法對細(xì)胞內(nèi)DNA含量進(jìn)行檢測時，可以將細(xì)胞周期各時相區(qū)分為G1/G0期，S期和G2/M期。

PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合，其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，就可以得到細(xì)胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài)，從而計(jì)算出各個期的百分含量。

實(shí)驗(yàn)方法

Step1：細(xì)胞培養(yǎng)

Step2：轉(zhuǎn)染或藥物處理

Step3：細(xì)胞收集

Step4：加周期試劑

Step5：上機(jī)檢測

案例展示

在施加藥物后，細(xì)胞周期明顯阻滯。

技術(shù)總結(jié)

1、考慮到進(jìn)行流式時需要用到對照組細(xì)胞設(shè)置空白組（用于調(diào)節(jié)電壓）和單染組細(xì)胞（用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償），因此要求該組細(xì)胞量較其他組多；

2、如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度偏低，細(xì)胞量較少，則適當(dāng)增加離心時間。收集細(xì)胞時，應(yīng)該連同上清一起收集，同時胰酶消化時間不宜過長，否則容易引起假陽性；

3、檢測細(xì)胞經(jīng)過轉(zhuǎn)染等處理后可能會帶有自發(fā)熒光，應(yīng)注意選擇試劑盒的顏色通道 如：帶綠色熒光時，應(yīng)選擇紅光試劑盒；

4、細(xì)胞鋪板應(yīng)選擇細(xì)胞狀態(tài)良好的時候進(jìn)行，且避免因反復(fù)吹打形成機(jī)械損傷，而出現(xiàn)細(xì)胞碎片過多。

送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)