本試劑盒中采用配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無(wú)需反復(fù)離心,通過(guò)裂解和吸附獲得高質(zhì)量的基因組DNA。該DNA 無(wú)需進(jìn)行純化可以直接用于PCR、熒光定量PCR、LAMP、STR等擴(kuò)增。
NuSmart® DNA Lysis 可用于血樣、唾液、腹水、細(xì)胞、組織、拭子、DNA 病毒、大腸桿菌、農(nóng)桿菌、葡萄球菌、環(huán)境樣本(例如擦拭物、水樣本、鞋底)、支原體、衣原體以及植物等樣品中基因組DNA的提取。
本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。
試劑盒組成
保存條件
4oC 保存。使用前將NuSmart® DNA Lysis 充分混勻。
需要準(zhǔn)備
金屬恒溫浴、離心機(jī)
使用方法
一、不同樣品的處理方法
1. 組織液的處理
(1)組織液包括組織研磨液、細(xì)胞懸液、血清、血液、唾液、尿液、精液、拭子處理液※等。取10 μL組織液置于離心管中。
※:棉簽放入500μL生理鹽水或無(wú)菌水中,浸泡5-10min,用力擠壓后取10 μL置于離心管中。
(2)加入20 μL DNA Lysis。
(3)充分混勻。
(4)置于55oC 加熱5 分鐘。溶液即為DNA 模板。
2. 組織塊的處理
(1)用眼科剪剪取1-2mm 組織塊,并將組織塊剪成肉泥狀。
(2)加入20 μL DNA Lysis。
(3)充分混勻。
(4)置于55oC 加熱5分鐘。
(5)10,000rpm 離心2-3 分鐘,取上清。上清即為DNA 模板。
3. 其他樣本的處理
(1)菌類包括大腸桿菌、農(nóng)桿菌、葡萄球菌等。取20 μL DNA Lysis 放置在離心管中。
(2)用接種針/無(wú)菌牙簽挑取菌斑或10μL 培養(yǎng)溶液放入(1)中。
(3)充分混勻。
(4)置于55oC 加熱5 分鐘。溶液即為DNA 模板。
4. DNA 病毒的處理
(1)細(xì)胞培養(yǎng)液參考“組織液的處理"。
(2)組織樣本參考“組織塊的處理"。
5. 植物樣本的處理
(1)葉片參考“組織塊的處理"。
(2)種子需磨碎后參考“組織塊的處理"。
二、推薦PCR 反應(yīng)體系
注意事項(xiàng)
一、試劑盒使用前注意事項(xiàng)
(1)所有試劑按照溫度儲(chǔ)存。
(2)實(shí)驗(yàn)前后務(wù)必對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材需使用商品化的無(wú)酶耗材。
(3)DNA Lysis 采用配方,若出現(xiàn)肉眼可見小球狀物質(zhì)屬于正常現(xiàn)象。
二、試劑盒使用過(guò)程中注意事項(xiàng)
(1)PCR 過(guò)程中推薦使用陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。
(2)整個(gè)過(guò)程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,減少環(huán)境污染。
三、試劑盒使用后注意事項(xiàng)
(1)DNA Lysis 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 個(gè)月。避免反復(fù)凍融,防止基因組斷裂。
(2)PCR 反應(yīng)完成后,嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開蓋。在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖電泳,以防止氣溶膠污染。
(3)為防止試劑盒污染,請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。
檢測(cè)實(shí)例
來(lái)源 范圍
細(xì)胞 293T、A549、Vero、PK15、Sp2/0、HCT-116、Marc145、ST、siHa、MCF-7
人 頭發(fā)、唾液、咽拭子、全血
小鼠 心、肝、脾、肺、腎、腦、脊柱、胃、大腸、小腸、膽囊、尾巴、腳趾、皮、耳朵、肌肉、EDAT 抗凝血、肝素鈉抗凝血、枸櫞酸鈉抗凝血
豬 心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)、精液、全血、血清
雞 胃、肝、心、肺、脾
病毒 ASFV、PRV、PPV、PCV
細(xì)菌 金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、農(nóng)桿菌、結(jié)核桿菌
真菌 酵母菌、白木耳、靈芝
植物 煙草、擬南芥、油菜、水稻、大豆、玉米、小麥、棉花、百脈根、西紅柿、土豆、茄子、胡蘿卜、龍眼、荔枝、蘋果、香蕉、葡萄、鐵皮石斛、丹參、益母草、紅花、紫草、苦參、艾葉
亞洲 鯽魚魚鰭、魚泡、魚鱗、魚籽
其他物種 支原體、衣原體