熒光素酶報告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。

Luciferase報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。然后可以通過熒光測定儀也稱化學發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。是檢測 轉(zhuǎn)錄因子 與 目的基因 啟動子區(qū)DNA相互作用的一種檢測方法。

雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)介紹

生物體內(nèi)DNA轉(zhuǎn)錄成RNA是基因表達的關鍵過程,基因表達調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。基因分子生物學研究領域的趨勢之一是逐漸從基因結(jié)構和功能分析轉(zhuǎn)到基因順式作用元件和轉(zhuǎn)錄因子及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制上,對基因調(diào)控的研究將是今后相當長一段時間內(nèi)功能基因組學研究的熱點之一。雙熒光素酶報告基因檢測(Dual- Luciferase reporter assay,DR)已成為研究轉(zhuǎn)錄因子參與基因調(diào)控的有效手段,通過對啟動子DNA片段的分析,驗證啟動子結(jié)合元件的反式激活能力,探討轉(zhuǎn)錄因子在信號轉(zhuǎn)導中的分子機制。

熒光素酶報告應用原理

轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構、行使調(diào)控基因表達功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式作用元件實現(xiàn)共價結(jié)合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferase assay）是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動子中的特異順序結(jié)合的重要手段。

其原理簡述如下：

（1）構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質(zhì)粒，如pGL3-basic等。

（2） 將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細胞或其它相關的細胞系。如果此轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達，熒光素酶的表達量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強度成正比。

（3） 加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應，產(chǎn)生熒光，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。

客戶須知：

客戶需提供基因序列信息，待研究轉(zhuǎn)錄因子信息。

服務中的轉(zhuǎn)染效率；

使用的熒光素酶報告基因檢測試劑盒；

提供給客戶目的基因的質(zhì)粒和甘油菌；

生物服務內(nèi)容

目的基因的調(diào)取及載體構建；

基因測序以及載體構建；

將構建質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到目的細胞；

使用熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測；

比較處理組和對照組的熒光酶活性。