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裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)介紹2024年已更新
更新時(shí)間:2024-04-25   點(diǎn)擊次數(shù):659次

裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)介紹2024年已更新

裸鼠腫瘤模型

 

無胸腺裸鼠(Nude Mouse,簡稱裸鼠)目前已成為醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究領(lǐng)域中*的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,它是先天性胸腺缺陷的突變小鼠,裸鼠接種成活的腫瘤對化療藥物的敏感性與臨床所見十分相近。根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量,一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤大小測量一般為1周兩次,游標(biāo)卡尺測量腫瘤最長和最短部位,腫瘤不宜生長過大,一般不要超過1000mm3。

 

 裸鼠腫瘤模型實(shí)驗(yàn)步驟

1、細(xì)胞的狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵,所以細(xì)胞生長狀態(tài)一定要好,取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜。收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

 

2、胰酶消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍,目的為去除細(xì)胞中的血清。

 

3、用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度,一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支,接種體積為0.1ml,因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個(gè)細(xì)胞/ml。

 

4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下,一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成,途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝。

 

5、選擇的裸鼠一般在5-8周齡,體重18-20g左右,種植部位選擇血供豐富區(qū)域,如腋窩中后部、腹股溝中上部。

 

6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散,防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率。

 

7、接種時(shí),針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn),約1cm深,減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。

 

8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚,小拇指夾住裸鼠尾巴。

 

9、接種后一周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。

 

10、根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特性和接種細(xì)胞的量,一般皮下成瘤的周期為1-2個(gè)月。腫瘤不宜生長過大,一般不要超過1000mm3 ,腫瘤負(fù)荷過大常常會(huì)以違背動(dòng)物倫理而被雜志社刁難(因?yàn)檫@個(gè)問題悲慘地被plos one拒過稿)。

 

11、腫瘤大小測量一般為1周兩次,游標(biāo)卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2*a*b2 (a為長軸,b為短軸)

 

12、皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA,一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等

 


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